Celetrix電轉儀（細胞電穿孔儀）    

1500A-EX電轉儀，最大轉染體積1000uL.

電轉染，最關心的是什么？

1.轉染效率

2.細胞死亡率

對一批同樣的細胞，性質相似，為什么有的細胞順利轉入了 DNA, 有的細胞沒有得到DNA.，有的細胞電轉后活的好好的，有的就被‘電死’了。

從電轉儀的角度來講，

如果電轉染時候每個細胞受到的電壓相同，電擊時間相同，毫無疑問，通過調節(jié)電擊電壓，電擊時間，可以得到一個較高的轉染效率和較低的細胞死亡率。

問題是，傳統(tǒng)的電擊杯，宏觀上可以控制電轉儀每次電擊時間和電壓相同，但微觀上，電擊杯里面不同位置的細胞分到的電壓相同嗎。

答案是否定的。且將電擊杯里的小世界放大了分析。

1.電擊杯液面部分

 電極杯內由于液體表面張力的作用，液面不平，導致對液體內部電壓分配的均勻度有很大的影響。電壓分配可以用一個簡化的等效電路來說明。電極杯內液體可以分割成相同的部分，每個部分電阻相同多路先串聯(lián)再并聯(lián)，每一路兩端總電壓相等。

液面翹角處，相當于電阻先并聯(lián)后再串聯(lián)入電路，此處阻值變小，在電路中分壓變?。ㄈ缬覉D ），細胞電壓不夠不能電轉。由于兩端總電壓相同，多出來的電壓分到液體凹面下方的區(qū)間，導致此處電壓過高（如右圖），細胞死亡。

結論：電極杯里靠近液面的部分細胞分配到的電壓相差較大。

2.靠近電極部分

電極杯中樣品與電極接觸面積大，電化學反應產生毒性物質多，并且產生非常多的氣泡。氣泡對電轉的實際影響非常大。

由于氣泡是絕緣體，電流只能從氣泡之間的間隙溶液流過，這樣導致氣泡間隙的溶液中電流富集升高，處于其中的細胞因承受太高的電壓而死亡。氣泡作為一個球形絕緣體，可以扭曲周圍電流的走向。氣泡側面（氣泡間隙溶液）電流變大，而氣泡的前后兩方都是低電流區(qū)，處于此區(qū)的細胞得到電壓不夠，不能電轉。見右圖。

小結：

電極杯內的溶液上方受到液面效應 影響，電場不均勻?？拷鼉蓚€電極1-2mm的區(qū)域由于氣泡的作用，電場也不均勻。電極杯內電場比較均勻的較優(yōu)電轉區(qū)域很?。ㄓ覉D藍色部分），而1mm或者2mm電極杯甚至可能沒有較優(yōu)電轉區(qū)域。

Celetrix電轉儀如何避免以上問題

1.Celetrix工作時電轉管時密閉的，充滿了電轉液和電轉樣品，沒有液面效應

2.Celetrix工作時電轉管是加壓的，產生的氣體被壓縮溶于液體，而且相比于電擊杯，Celetrix工作時電轉管與液體接觸面積很小。幾乎避免了氣泡效應。

再加上Celetrix電轉儀本身獨特的設計（已經獲得中國，美國，歐盟，日本等國家和地區(qū)的專利）。

Celetrix 電轉儀一次可以電轉從20uL到200uL不等的樣品，適應不同實驗需要。

Celetrix積累了多種血細胞，纖維細胞，上皮細胞，腎細胞，神經細胞等電轉難易程度不一的各類細胞的優(yōu)化電轉參數(shù)，用戶只需根據(jù)我們的參數(shù)稍作實驗便可得到適合自己的參數(shù)。對于罕見的細胞類型，Celetrix實驗室可以協(xié)助用戶獲取最優(yōu)電轉參數(shù)。

Celetrix可以承諾同一實驗室的同一類細胞，可以做到同類產品中轉染率最高，細胞死亡率最低。

公司在上海備有樣機。

電轉舉例

1.T細胞的高效轉染

傳統(tǒng)的轉染方法對于T細胞非常困難，特別是對于質粒的轉染。

Celetrix新一代電轉技術可以高效轉染從新鮮PBMC到刺激培養(yǎng)階段的T細胞。與其他電轉技術相比，Celetrix電轉技術具有最高的效率。同時，我們的技術也具有最高的細胞存活率，使得CAR-T，TCR-T制備、CRISPR介導的基因下調等變得容易。

所示圖片攝自長期培養(yǎng)的電轉后T細胞。T細胞在電轉后可以聚集生長，并且GFP表達可以維持很長時間。

2.Ipsc干細胞高效電轉

人類的iPSC電轉比較困難，一是達到高效率不容易，二是維持iPSC的未分化狀態(tài)不容易。    

Celetrix新一代電轉技術可以用于電轉人的iPSC，比如ACS-1030（ATCC）。電轉效率保守估計可以達到73%以上，同時細胞存活率非常高，大部分細胞都存活很好。     

ACS-1030 transfection with GFP plasmid after 24 hours

survival>85%

GFP%>73.7%

 24h

電轉3天后，iPSC已經自發(fā)形成團塊生長的典型未分化狀態(tài)，與未電轉的細胞看不出區(qū)別。同時，使用Celetrix電轉技術，營養(yǎng)細胞層也不是必須的，給實驗帶來了極大的方便。

72h

3.mRNA超高效電轉

有一些實驗方法需要轉染mRNA。Celetrix新一代電轉技術也可以電轉mRNA。

mRNA電轉的效率一般比質粒高。比如GFP的mRNA電轉到Jurkat可以達到97.5%的超高效率。

 mRNA表達的均勻度比質粒要高，總體來說mRNA表達的蛋白在各個細胞中比較均衡。

  mRNA的蛋白表達量一般不如強表達的質粒，因此要達到較高的表達水平以及較長的表達持續(xù)時間，使用Celetrix的電轉技術就非常有必要。

  siRNA電轉比mRNA更加容易。一般來說siRNA電轉本身可以達到接近100%的效率，但是蛋白水平的下調是由siRNA的性質決定的。